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ELISA實(shí)驗(yàn)制備抗體酶結(jié)合物的方法
日期：2025-04-19 00:44
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摘要：
酶標(biāo)記的抗原或抗體稱為結(jié)合物（conjugate）?？乖捎诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原，則可參考抗體酶標(biāo)記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。
1、戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，酶和抗體中的氨基可通過(guò)該試劑進(jìn)行偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接 AP），也可用二步法（如連接 HRP）。偶聯(lián)方法為：2～5 mg 純抗體與 5 mg AP 混合于1ml 0.1mol/L pH6.8 的磷酸鹽緩沖液中，并用此磷酸鹽緩沖液對(duì)該酶和抗體混合液于4℃ 下透析平衡。磁力攪拌下，向酶和抗體溶液中緩慢加入1...
酶標(biāo)記的抗原或抗體稱為結(jié)合物（conjugate）。抗原由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原，則可參考抗體酶標(biāo)記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。
1、戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，酶和抗體中的氨基可通過(guò)該試劑進(jìn)行偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接 AP），也可用二步法（如連接 HRP）。偶聯(lián)方法為：2～5 mg 純抗體與 5 mg AP 混合于1ml 0.1mol/L pH6.8 的磷酸鹽緩沖液中，并用此磷酸鹽緩沖液對(duì)該酶和抗體混合液于4℃ 下透析平衡。磁力攪拌下，向酶和抗體溶液中緩慢加入1％戊二醛0.05 ml，在室溫下放置2小時(shí)。在 4℃下使用 50mM pH8.0 Tris緩沖液對(duì)偶聯(lián)后的酶和抗體溶液透析平衡，即得酶標(biāo)抗體。
2、過(guò)碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含 18％ 碳水化合物，過(guò)碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉（NaBH4）中和多余的過(guò)碘酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成按摩爾比例結(jié)合的酶標(biāo)結(jié)合物。有人認(rèn)為此法為辣根過(guò)氧化物酶交聯(lián)有效的方法。但也有只認(rèn)為由于所用試劑較為劇烈，各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重復(fù)。